Методы FIGE
Метод FIGE (Field Inversion Gel Electrophoresis) был предложен в 1986 г. G.F. Carle с соавт. [ Carle G.F. e. a., 1986 ]. Суть его заключается в том, что периодически меняют полярность электрического поля, приложенного к гелю. При этом общая тенденция ДНК к движению "вперед" сохраняется за счет того, что время "прямой" полярности превосходит время "обратной" (считается, что оптимальным соотношением является 3:1). При соответствующем подборе параметров пульса возможно разделение молекул размером до 2 Мб. Этот метод значительно улучшает ускоряет разделение и небольших молекул (до 15 кб).
К его достоинствам относятся простота аппаратного оформления (подходят любые камеры для простого электрофореза), и то, что разделение молекул ДНК не зависит от их местоположения на геле. Недостатком же является нелинейная зависимость между скоростью миграции и размером молекул ДНК. Для каждого времени пульса существует "окно" размеров фрагментов ДНК, в котором их скорость миграции близка к нулевой. При этом молекулы с большими и меньшими размерами мигрируют с заметными скоростями. Этот эффект может стать причиной артефактов разделения (комиграции полос разного размера и так далее). В некоторой степени удается обойти его, применяя возрастающий градиент времени пульса.
В общем это самый простой и достаточно надежный метод разделения молекул ДНК размером до 200-300 кб.
Смотрите также:
