Методы CHEF
Метод CHEF (Contour-clamped Homogeneous Electric Field) был предложен в 1986 г. G. Chu с соавт. [ Chu G. e. a., 1986 ]. Существовавшие модификации PFGE (за исключением FIGE) имели общий недостаток - скорость и траектория движения молекул ДНК в геле зависели от их местоположения. Для устранения этого недостатка авторы расположили точечные электроды по сторонам шестигранника. На каждый электрод подавали потенциал, равный тому, который был бы создан в этой точке геля проводником бесконечной длины. В результате поле в геле стало равномерным, что резко улучшило качество разделения ДНК (хромосомы S. cerevisiae стали разделяться в 16 полос, а не в 12, как в других модификациях PFGE). Для этого метода не существует верхнего предела разделения ДНК (он определяется только отсутствием соответствующих маркеров для подбора параметров разделения).
Практически в агарозных гелях в настоящее время возможно разделение фрагментов ДНК размером до 9 Мб. Следовательно, пока нельзя разделять хромосомы высших организмов (самая маленькая человеческая хромосома имеет размер около 50 Мб).
Необходимым условием широкого применения метода PFGE является возможность надежного, воспроизводимого и эффективного получения крупных фрагментов ДНК, что стало возможным после открытия редкощепящих рестриктаз.
Смотрите также:
