Катепсин G: определение активности
Лучшими субстратами для определения активности катепсина G являются Suc-Val-Pro-Phe-NA и Suc- Phe-Pro-Phe-NA (рН-оптимум равен 7,2) [ Reilly, ea 1982 , Tanaka, ea 1985 ]. В отличие от других сериновых протеиназ (трипсин, химотрипсин, протеиназы плазмы крови), стабилизируемых СаСl2, катепсин G ингибируется ионами Са2+ [ Tanaka, ea 1985 ]. Для выявления активности катепсина G рекомендуется использовать буферы с высокой ионной силой или с детергентами (содержащие 1 М NaCI или 0,5 М NaCI с Brij-35) [ Tanaka, ea 1985 , Barrett, ea 1981 ). Определению активности катепсина G не мешает наличие в буфере диметилсульфоксида (2,5-18%, w/w) [ Tanaka, ea 1985 ], а добавление полианионов (гепарина или декстрансульфата) в концентрации 30 мкг/мл приводит к увеличению активности фермента (по гидролизу BzTyrOEt) на 25% [ Peterson, ea 1989 ]. Наилучшим синтетическим необратимым ингибитором катепсина G является хлорметилкетон N-бензилоксикарбонил-С1у-Leu-Рhе с kapp/[I]=51M-1c-1 [ Barrett, ea 1981 ]. Катепсин G не ингибируется каптоприлом (SQ 14225) или тепротидом (SQ 20881) [ Klickstein, ea 1982 ]. Как и тонин , катепсин G не инактивирует брадикинин [ Klickstein, ea 1982 ].
Смотрите также:
