Ген C/EBPальфа: промотор
Один из подходов, примененный для выяснения событий, предшествующих экспрессии C/EBPальфа в процессе развития адипоцитов, состоит в идентификации cis-регуляторных элементов в пределах промотора C/EBPальфа и транскрипционных факторов, взаимодействующих с данными элементами.
Анализ последовательности ДНК, сопряженный с футпринтингом ДНКазой I 5'- фланкирующей области гена мыши выявил наличие сайтов связывания как для известных, так и для еще не охарактеризованных транс-действующих факторов в пределах удаленного промотора [ Vasseur-Cognet ea 1993 , Christy ea 1991 , Legraverend ea 1993 ].
Указанные участки включают сайты для C/EBP , сайты CUP (недифференцированного белка C/EBP), сайты S1 , сайты Zif268/Krox20 , сайты NF1 , сайты USF , сайты c-Myc , а также сайты ядерных белков, связывающихся с основным транскрипционным элементом.
Сайты связывания C/EBP и CUP отличным образом отображаются при футпринтинге преадипоцитов в сравнении с ядерным экстрактом адипоцитов и были хорошо изучены [ Vasseur-Cognet ea 1993 , Christy ea 1991 ]. Некоторые данные позволяют предположить, что C/EBP аутоактивирует транскрипцию собственного гена посредством взаимодействия с C/EBP-связывающим сайтом, поддерживая, таким образом, экспрессию C/EBPальфа при достижении преадипоцитами окончательно дифференцированного состояния.
Было показано, что:
1) антисенс-РНК C/EBPальфа не только блокирует экспрессию белка C/EBPальфа, но также блокирует транскрипцию гена C/EBPальфа [ Lin ea 1992 ];
2) промотор C/EBPальфа трансактивируется посредством C/EBPальфа [ Lin ea 1993 , Legraverend ea 1993 ];
3) индуцируемая [ Lin ea 1994 ] или эктопическая [ Freytag ea 1994 ] экспрессия C/EBPальфа является достаточной для активации экспрессии внутреннего гена C/EBPальфа.
В 30-40 п.н. от 5'-конца C/EBP-связывающего сайта расположен двойной цис-элемент со связывающими сайтами для CUP и Sp-1-подобного GT- box-связывающегося белка [ Vasseur-Cognet ea 1993 , Christy ea 1991 ].
Связывание CUP с этим элементом существенно увеличивается при взаимодействии первого с Sp1-подобным белком [ Vasseur-Cognet ea 1993 ].
В процессе дифференцировке преадипоцитов 3T3-L1 в адипоциты ДНК-связывающая активность CUP снижается (вероятно, из-за пониженного уровня экспрессии CUP), что совпадает со значительно возрастающей экспрессией C/EBPальфа. Предварительные данные [ Vasseur-Cognet ea 1993 ] позволяют предположить, что C/EBP-связывающий сайт действует совместно с прилегающим к нему регуляторным элементом CUP (см. ниже) для поддержания гена C/EBP в неактивном состоянии до начала дифференцировки. На основе этих и других данных [ Vasseur-Cognet ea 1993 , Vasseur-Cognet ea 1993 ] была предложена модель , согласно которой CUP, Sp-1-подобный белок и Sp1 образуют комплекс, соединяющий GUP/GT-box и C/EBP-связывающие элементы, блокируя таким образом доступ к C/EBP- связывающему сайту. Таким образом, при индукции дифференцировки и падении уровня экспрессии CUP связывающий комплекс разрушается, открывая гомологам C/EBP доступ к C/EBP-связывающему сайту и активации экспрессии гена C/EBPальфа.
Смотрите также:
