Липопротеины: выделение с помощью ультрацентрифугирования
Выделение липопротеинов с помощью препаративного ультрацентрифугирования заключается обычно в их последовательной флотации, причем перед каждой процедурой флотации плотность плазмы или сыворотки доводится до нужного значения путем добавления хлористого натрия (d 1,006) или раствора, содержащего смесь бромистого калия и хлористого натрия (d 1,346), как впервые предложили Хавел с соавт. ( Havel R.J. ea, 1955 ).
Так, ЛПОНП выделяют при d 1,006, ЛППП - 1,019, ЛПНП - 1,063 и ЛПВП - 1,21 в угловых роторах при + 10 С. В зависимости от типа ротора и скорости центрифугирования каждое разделение занимает от 12 до 36 часов. Всплывшие липопротеины либо отсасывают пипеткой, либо отделяют от остального содержимого пробирки путем разрезания ее специальным ножом. Полученные липопротеины разбавляют до нужного объема и подвергают электрофорезу, и/или определяют содержание в них липидов и белков. Существуют также небольшие пневматические центрифуги, позволяющие разделять липопротеины менее чем за 6 часов.
Смотрите также:
