Мембранные белки эритроцитов: методы исследования поверхности
Поверхность мембранных белков, обращенную к цитоплазме, можно изучать на примере эритроцитов (см. плазматическая мембрана эритроцитов ).
Характер расположения в мембране того или иного белка можно установить двумя способами.
1) Применение реагентов, меченных флуоресцентными красителями или несущих радиоактивную метку. Эти реагенты не способны проникать через мембрану и поэтому ковалентно связываются со специфическими группами только на ее наружной стороне. Мембраны растворяют. Белки разделяют методом электрофореза в полиакриламидном геле присутствии ДСН , а меченные белки идентифицируют либо по радиоактивности с помощью радиоавтографии гелей, либо по флоуресценции в ультрафиолетовом свете. Используя такое направленное мечение, можно определить, как конкретный белок ориентирован в мембране: если он метится одновременно и на внешней стороне, и на цитоплазматической стороне, то это трансмембранный белок .
2) Обработка наружной или внутренней стороны мембраны не проникающими через нее протеолитическими ферментами: если какой-либо белок частично расщепляется в обоих случаях, то он должен быть трансмембранным.
Смотрите также:
