Мембранные белки: электрофорез в присутствии ДСН
Солюбилизация белков с помощью детергентов была с большим успехом использована для изучения главных белков, присутствующих в различных мембранах. В типичном случае мембраны сначала прогревают до 1ОО С в 1%-ном растворе сильного детергента ДСН , который разрушает все нековалентные белок-белковые и белок-липидные взаимодействия и полностью денатурирует белки. Полученный раствор наносят затем на полиакриламидный гель, содержащий ДСН, и подвергают электрофорезу в сильном электрическом поле в течение нескольких часов. Количество отрицательно заряженного ДСН, связавшегося с белком, пропорционально массе полипептида, вследствии чего суммарный отрицательный заряд детергента значительно превышает собственный заряд белка. Поэтому каждый отдельный белок перемещается в электрическом поле со скоростью,определяемой в конечном счете его молекулярной массой: чем крупнее белок, тем в большей степени он задерживается сложной сетью молекул полиакриламида, составляющих гель, и, следовательно, тем медленнее он движется. Если после электрофореза произвести окрашивание белков в геле, используя краситель, связывающийся с белком, например кумасси синий, то главные белки образца можно увидеть как индивидуальные полосы в геле. В дальнейшем для изучения мембранных белков стал применяться метод двумерного электрофореза.
Смотрите также:
