Рецепторы: получение в очищенном виде
В настоящее время в виде очищенных индивидуальных белков получены рецепторы стероидных гормонов (прогестинов, глюкокортикоидов и половых гормонов) и холинергический рецептор никотинового типа. Успех в выделении холинергического рецептора в значительной степени определился удачным выбором объекта. Было обнаружено, что концентрация этих рецепторов в электрическом органе ската Torpedo или угря Electrophorus в сотни раз выше, чем во всех других исследованных тканях и объектах. В электрическом органе тысячи мембран соединены параллельно в одну "батарею", в результате чего изменение потенциала на каждой из мембран, возникающее под действием ацетилхолина и составляющее десятки милливольт, суммируется и дает на "выходе" потенциал, равный киловольту. Эти мембраны, буквально насыщены холинергическими рецепторами. Из 1 кг электрического органа можно выделить сотни миллиграммов гомогенного препарата холинергического рецептора. Для получения индивидуального белка достаточна очистка всего в сто раз.
Определенную роль в очистке холинергического рецептора сыграло также применение нейротоксинов из яда кобры. Эти полипептиды с молекулярным весом в несколько тысяч очень прочно и специфически связываются с холинергическим рецептором. Использование аффинной хромотографии на колонках с нейротоксинами оказалось наиболее эффективным способом очистки рецептора. Кроме того, некоторые нейротоксины, например бунгаротоксин, связываются с холинергическим рецептором очень избирательно и практически необратимо. После преинкубации неочищенных фракций электрического органа с бунгаротоксином, меченным # 125J или #3H, можно проводить выделение, следя за рецептором по связанной с ним радиоактивности.
Смотрите также:
