ДНК полимераза дзета
В 1993 г. из тимуса теленка выделили новую ДНК-полимеразу, отличающуюся по свойствам от ранее описанных ферментов, которую предложили обозначить как фермент дзета-типа [ Bialek G., Grosse F.1993 ].
Новая ДНК-полимераза обладала высокой 3'-5' экзонуклеазной корректорской активностью (отношение активностей полимеразы и экзонуклеазы составляло от 1 до 3) и осуществляла дистрибутивный синтез ДНК как в отсутствие PCNA , так и в присутствии этого фактора процессивности ДНК-полимераз дельта и эпсилон .
При электрофорезе выделенного фермента в денатурирующем полиакриламидном геле полипептид 66 кДа был основным. В препаратах присутствовали также полипептиды 40 и 35 кДа - вероятные продукты протеолиза основного полипептида. По данным седиментационного анализа и гельфильтрации нативный фермент имеет молекулярную массу около 120 кДа, что согласуется с тем, что он является димером полипептида р66.
Новая лимераза на нескольких этапах очистки соочищалась с ДНК-полимеразой альфа . Как и альфа-полимераза, фермент ингибировался афидиколином , но был устойчив к BuAdATP.
Функция новой ДНК-полимеразы неизвестна. Относительно высокая удельная экзонуклеазная активность (и низкая полимеразная) согласуется с вспомогательной корректорской ролью при репликации ДНК, осуществляемой ДНК-полимеразами типа альфа , дельта и эпсилон , или с участием фермента в репараций ДНК.
Близкий по свойствам фермент выделен из икры вьюна [ Шарова Н.П. et al., 1994 , Шарова Н.П. et al., 1995 ]. Этот фермент, подобно ДНК-полимеразе бета , осуществлял дистрибутивный синтез на поли(dА)-матрице с затравкой олиго(dТ) как в присутствии PCNA , так и в его отсутствие, однако в отличие от бета-полимеразы фермент обладал высокой экзонуклеазной активностью, специфичной в отношении неспаренных 3'-концевых нуклеотидов.
К характерным особенностям нового типа ДНК-полимераз, выделенных из тимуса теленка и икры рыб, можно отнести высокую чувствительность к AMP , который в концентрациях 1-5 мМ ингибировал обе активности - полимеразную и экзонуклеазную. В эмбрионах вьюна, развивающихся в условиях окислительного стресса, активность этой ДНК-полимеразы, как и ДНК-полимеразы бета, увеличивалась в несколько раз [ Пескин А.В. et al., 1997 ], что согласуется с участием обоих ферментов в репарации ДНК.
ДНК-полимераза дзета обнаружена в 1996 г. у дрожжей S. cerevisiae. При исследовании белков Rev3 и Rev7 , которые необходимы для мутагенеза, индуцируемого в ответ на повреждения ДНК, оказалось, что их комплекс обладает ДНК-полимеразной активностью. Эта полимераза способна эффективно использовать в качестве матрицы ДНК, содержащую циклобутановые димеры. В таких условиях активность ДНК-полимеразы альфа составляет лишь 1% от активности ДНК-полимеразы дзета.
Смотрите также:
