Триплексов стабилизация
Для практического применения триплексов необходимо, чтобы они были стабильны при ионных условиях, близких к физиологическим. Однако, Py-Pu-Py триплекс требует для своей стабильности кислых pH, а Py-Pu-Pu - миллимолярных концентраций различных двухзарядных ионов. Поэтому было предпринято множество попыток их стабилизировать. Большинство исследований относилось к преодолению pH-зависимости. Оказалось, что полиамины, в особенности спермин и спермидин, стабилизируют Py-Pu-Py триплексы при физиологических pH, видимо, благодаря уменьшению отталкивания между фосфатными остовами при взаимодействии их с полиаминами ( Moser H.E. and Dervan P.B., 1987 , Hampel K.J. ea, 1991 , Hampel K.J. ea, 1993 ). Миллимолярные концентрации полиаминов были обнаружены в клетках ( Tabor C.W. and Tabor H., 1984 ). Требование протонированности цитозинов и, тем самым, кислых pH среды можно снять заменой их на синтетические аналоги, не требующие протонирования, например: N6-метил-8-оксо-2-дезоксиаденозин ( Krawczyk S.H. ea, 1992 ), псевдоизоцитозин ( Ono A. ea, 1991 ), 7,8-дигидро-8-оксиаденины ( Jetter M.C. and Hobbs F.W., 1993 ), 3-метил-5-амино-1Н пиразоло (4.3-d) пиримидин-7-оксиаденин ( Koh J.S. and Dervan P.B., 1992 ).
Дополнительная стабилизация может быть достигнута за счет сшивки олигонуклеотида с интеркалирующим агентом, например, с производной акридина ( Le Doan T. ea, 1987 ). При этом, правда, уменьшается специфичность связывания. Сшивка с псораленом делает образование триплекса необратимым после его облучения ультрафиолетом ( Takasugi M. ea, 1991 ). Триплекс-специфический лиганд бензопироиндол преимущественно интеркалирует в тройную, нежели в двойную спираль ДНК, и, таким образом, существенно стабилизирует триплексы ( Pilch D.S. ea, 1993 ).
Особое место среди олигонуклеотидных аналогов занимает ПНК (пептидно-нуклеиновая кислота), обладающая достаточно большой силой связывания с ДНК, избирательностью по последовательности ( Nielsen P.E. ea, 1991 , Egholm M. ea, 1992a , Egholm M. ea, 1992b , Cherny D.Y. ea, 1993 ) и очень высокой стабильностью в клеточных экстрактах ( Demidov V.V. ea, 1994a ). Более подробное рассмотрение свойств ПНК приведено в разделе: Структура ПНК .
Смотрите также:
