ген ПОМК: 5'-фланкирующая последовательность
Последовательности 5'-фланкирующие первый экзон эукариотических генов необходимы для обеспечения точности и эффективности транскрипции гена. Эти последовательности включают внутренние промоторные элементы (т.е. TATA-бокс и CAAT-бокс ) и множество более удаленных ДНК элементов, а также сайты связывания факторов транскрипции, которые определяют (опосредуют) тканеспецифичную или гормонально регулируемую экспрессию гена, или модулируют уровень транскрипции ( Jones N.C. ea, 1988 ; Muller M.M. ea, 1988 .
Для изучения роли 5'-фланкирующих последовательностей в регуляции экспрессии гена проопиомеланокортина человека J.Kraus и и его коллеги ( Kraus J. ea, 1993 ) сконструировали ряд слитых генных конструкций, состоящих из репортерного гена хлорамфениколацетилтрансферазы (CAT), промотора тимидинкиназы (ТК) вируса простого герпеса и разных фрагментов 5'-фланкирующей последовательности гена ПОМК человека из области от -676 до -39.
Поскольку не существует установленной линии клеток гипофиза человека, для первых экспериментов были выбраны линия клеток AtT-20 (линия клеток опухоли гипофиза мышей , продуцирующая проопиомеланокортин ) и линия клеток HeLa (человеческая клеточная линия, в которой не экспрессируется ген ПОМК ). Было показано, что 5'-фланкирующие последовательности гена проопиомеланокортина человека влияют на активность как их гомологичного промотора, так и на активность гетерологичного ТК промотора. Это может достигаться за счет взаимодействия регуляторных элементов с транс- активирующими факторами. При помощи футпринтинга ДНКазой I с ядерными экстрактами клеток AtT-20 или HeLa, J.Kraus и его коллегам ( Kraus J. ea, 1993 ) удалось локализовать, по крайней мере, пять связывающих сайтов для таких потенциальных факторов на 5'-фланкирующей последовательности гена проопиомеланокортина человека. Они были обозначены как HPE1(-83:-115), HPE2(-165:-180), HPE3(-230:-250), HPE4(-330:-340) и HPE5(-365:-390), сокращение от английского -human POMC element.
Смотрите также:
