ген ПОМК 5'- последовательность: сайты связывания
При помощи футпринтинга ДНКазой I с ядерными экстрактами клеток AtT- 20 или HeLa , J.Kraus и его коллегам ( Kraus J. ea, 1993 ) удалось локализовать, по крайней мере, пять связывающих сайтов для транс- активирующих факторов на 5'-фланкирующей последовательности гена проопиомеланокортина человека. Они были обозначены как HPE1(-83:-115), HPE2(-165:-180), HPE3(-230:-250), HPE4(-330:-340) и HPE5(-365:-390), сокращение от английского -human POMC element.
Было показано, что последовательность HPE1 связывается с экстрактами клеток обоих линий, приводит к усилению экспрессии гена CAT во всех тестируемых клетках и, соответственно, является ткане-неспецифичным элементом. Последовательности же остальных четырех сайтов HPE2-HPE5 связываются только с экстрактами линии клеток AtT-20 и усиливают экспрессию CAT репортерного гена только в клетках гипофизарного происхождения (AtT-20 и human Cushin's tumour клетки , произошедшие от кортикотрофных клеток гипофиза ; клетки пролактиномы ; клетки - производные гормонально неактивных опухолей гипофиза ). Интересно, что хотя сайты HPE2- HPE5 усиливают экспрессию CAT репортерного гена только в клетках гипофизарного происхождения, как раз высокая активность CAT, наблюдавшаяся в клетках пролактиномы после трансфекции генных конструкций, слитых с нуклеотидами из области -223/-414 промотора ПОМК, в значительной степени исключает возможность того, что последовательности -223/-414 являются регулирующими только экспрессию гена ПОМК в кортикотрофах . Так как в клетках пролактиномы не синтезируется мРНК ПОМК.
Поэтому авторы считают невыясненным до конца вопрос, являются или нет эти последовательности (по крайней мере HPE3-HPE5 -223/-414) специфичными для гипофиза и/или эндокринных тканей . Тем не менее, по их данным, ни в одних клетках - производных из периферийной ткани, данный район (-223/- 414) не оказывал никакого влияния на активность TK промотора.
Смотрите также:
