Trk-рецепторы с измененными IG-подобными мотивами
Иммобилизованные пептиды, соответствующие иммуноглобулин-подобным доменам (IgL) , в этой экспериментальной системе не способны были связываться ни с одним из нейротрофинов. Таким образом, данные, полученные как in vitro, так и in vivo при использовании модифицированных Trk-рецепторов, указывают на недостаточность одного только IgL-домена для связывания с лигандом и на необходимость участия в этом процессе лейцин-богатых мотивов.
С другой стороны, из работ по связыванию нейротрофинов с химерными Trk-рецепторами следовало, что IgL-домены, особенно ближайший к мембране IgLs, играют ключевую роль в узнавании лиганда и связывании с ним, а вся N-концевая область молекулы рецептора, включая второй LRM, не играет существенной роли в этом процессе.
Так, например, NGF связывался с химерой, содержащей IgL2 TrkA и N-концевую область TrkB, но не связывался с химерой, содержащей IgLz TrkB и N-концевую область TrkA [ Urfer ea 1995 , Perez ea 1995 ]. TrkC-химеры, в которых (IgL2) заменен на аналогичный домен TrkA или TrkB, связывали соответственно NGF или BDNF с высоким сродством. Более того, в экспериментах с TrkA и TrkC один Igl2 способен был связывать нейротрофины с таким же сродством, как и полноразмерные рецепторы, а делеции IgL2 приводили к потере способности связывать лиганд [ Urfer ea 1995 ].
Кроме того, было показано, что специфическая мутация во втором IgL- домене TrkB (C345S) ведет к тому, что NT4/5 теряет способность индуцировать трансформацию фибробластов, продуцирующих мутантный TrkB, в то время как BDNF не теряет этой способности [ Klein ea 1992 ]. Аналогичная мутация в TrkA влияет на лиганд-связывающие характеристики и превращает "нормальный" рецептор в активный Trk-онкоген , трансформирующий фибробласты независимо от присутствия лиганда [ Coulter ea 1990 ]. Результаты этих исследований позволили заключить, что второй IgL-домен принимает участие в узнавании лиганда.
Описаны образующиеся в результате альтернативного сплайсинга короткие делеции в области между IgL2 У трансмембранным доменом всех трех Trk- рецепторов [ Strohmaier ea 1996 , Garner ea 1996 , Barker ea 1993 , Shelton ea 1995 ].
Такие перестройки не влияли на связывание NGF с TrkA или BDNF с TrkB, но существенно снижали эффективность связывания последнего с NT4/5 и NT3. Таким образом, эта короткая область тоже вовлечена в узнавание лиганда.
Смотрите также:
