Аптамеры: взаимодействие с красителями
Аптамеры можно использовать для введения флуоресцентной метки в молекулы РНК, синтезируемые in vivo, для наблюдения за экспрессией соответствующих генов. Из пула случайных последовательностей были выделены 60-звенные олигорибонуклеотиды, специфически взаимодействующие с сульфородамином B. После введения в аптамеры мутаций и повторной селекции удалось получить олигонуклеотиды, взаимодействующие с флуоресцеином. В иммобилизованном состоянии эти аптамеры специфически связывали флуоресцентные красители и не давали перекрестных реакций.
В другой серии исследований были идентифицированы аптамеры, взаимодействующие с красителем Hoechst H33258, которые функционировали как in vitro, так и in vivo.
Последовательности аптамеров в форме кДНК встраивали в виде тандемных повторов в нетранслируемую область гена бета- галактозидазы , находящегося в составе экспрессирующего вектора. Вектор вводили с помощью трансфекции в клетки линии CHO , которые далее выращивали в присутствии красителя. При определении активности бета-галактозидазы через 24 ч после трансфекции установили, что ее синтез не происходил, если Hoechst H33258 присутствовал в питательной среде в концентрации 5-10 мM.
Смотрите также:
