Вектор pPR-TGATG-1
Превосходным вектором, прекрасно зарекомендовавшим себя в работе, является экспрессирующий вектор pPR-TGATG-1, сконструированный в лаборатории С.В. Машко (г. Москва).
В векторе структурная часть экспрессируемого гена соединяется через уникальный сайт рестрикции SacI с инициирующим кодоном ATG ( рис. II.11,б ). В результате образуется гибридный оперон, транскрибируемый с промотора лямбда-PR, дистальный цистрон которого представлен клонируемым геном, а цистрон, проксимальный промотору PR, содержит гибридный ген cro'-cat'-trpE , состоящий из слитых частей генов cro фага лямбда , хлорамфениколацетилтрансферазы cat и trpE E. coli. 3'-Концевая часть цистрона содержит область реинициации трансляции, SD-последовательность гена trpD E. coli и перекрывающиеся кодоны терминации и инициации трансляции (TGATG). В этой последовательности 3'-концевой нуклеотид G является первым нуклеотидом уникального сайта рестрикции SacI (GAGCTC).
В процессе синтеза белка, направляемого вектором, образуется короткий гибридный пептид Cro'-Cat'-TrpE длиной около 120 аминокислот. После терминации синтеза происходит реинициация синтеза полипептида, кодируемого клонированным геном, на перекрывающемся с кодоном TGA ATG-кодоне. Поскольку промотор PR в этом векторе контролируется температурочувствительным репрессором фага лямбда cIts857, экспрессия клонированного гена индуцируется повышением температуры до 42о и сопровождается инактивацией репрессора.
Смотрите также:
