Разделение ДНК и РНК хроматографическое
Метод аффинной хроматографии на олиго(dТ)-целлюлозе используется для специфической очистки эукариотических мРНК, большинство из которых содержит на 3'-конце поли(А)- последовательность. В олиго(dТ)-целлюлозе последовательности олиго(dТ)12-18 ковалентно присоединены к молекулам целлюлозы своими 5'-концевыми фосфатными группами. При использовании этого метода фракцию суммарной РНК наносят на колонку с олиго(dT)- целлюлозой в условиях, при которых происходит гибридизация поли(А)-последовательностей мРНК с комплементарными им последовательностями олиго(dТ)-целлюлозы. После отмывания несвязавшихся со смолой молекул РНК, большинство из которых являются рРНК и тРНК, фракцию поли(А)-РНК элюируют, прогревая колонку до температуры плавления поли(А)олиго(dТ)-гибридов или разрушая гибриды понижением ионной силы элюирующего раствора.
Смотрите также:
