РНК: спонтанное аминоацилирование
Процесс аминоацилирования тРНК аминоацил-тРНК-синтетазами in vivo происходит в два этапа: вначале фермент активирует соответствующую аминокислоту с образованием 5'- аминоациладенилата, который затем атакуется 2'(3')-концом тРНК, что сопровождается возникновением соответствующей ковалентной связи между аминокислотой и тРНК. Нагруженные таким образом молекулы тРНК далее используются рибосомами в качестве субстратов при образовании пептидных связей. Методом селекции из пула случайных РНК, представленного 1,7*1014 молекулами, были получены рибозимы, способные при наличии активированных аминокислот спонтанно аминоацилироваться. Пул РНК инкубировали при 0о с химически синтезированным фенилаланил-5'-аденилатом в присутствии ионов Mg2+ и Ca2+. Аминоцилированные РНК обнаруживали по появлению свободной альфа-аминогруппы фенилаланина. Молекулы РНК, меченные гидрофобными группами, очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в обращенной фазе. После 11 циклов отбора были получены спонтанно аминоацилирующиеся РНК со скоростью, в 105 раз превышающей скорость реакции в контроле. Распознавание аминокислоты рибозимом было слабым, поскольку образование специфических комплексов рибозима с субстратом обнаружить не удалось.
Смотрите также:
