MSP (methylation-specific PCR, ПЦР)
Это новый метод, позволяющий оценить статус метилирования индивидуальных CpG-островков. Его большим достоинством является высокая чувствительность, позволяющая анализировать измененные (метилированные) аллели в присутствии большого избытка аллелей дикого типа [ Herman, ea 1996 ].
Процедура состоит в предварительной обработке тестируемых ДНК бисульфитом натрия, что при определенных условиях приводит к дезаминированию цитозина с образованием урацила, тогда как метилированные остатки цитозина резистентны к такой процедуре. При последующей полимеразной цепной реакции ( ПЦР ) урацил заменяется на тимин. Таким образом оказывается возможным конструировать праймеры, избирательно амплифицирующие последовательности, содержащие (или не содержащие) метилированные остатки цитозина в CpG-островках. Метод позволяет детектировать 1 метилированный аллель в присутствии 1000 неметилированных.
Смотрите также:
