Контаминации клеточных культур: меры предупреждения
В Отделе клеточных культур Института цитологии РАН все клеточные линии, поступающие извне, как и культивируемые в лабораториях, проходят проверку на наличие в них микоплазм; причем линии, в которых микоплазмы не обнаруживаются, тестируют 2-4 раза с использованием люминесцентного микроскопа после окраски Hoechst 33258, а в отдельных случаях - с помощью ПЦР .
Принимая во внимание опыт работы исследователей Отдела клеточных культур Института цитологии РАН, а также Лаборатории микоплазм и L-форм бактерий НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалея АМН, можно рекомендовать следующие меры по предупреждению контаминации клеточных культур микоплазмами.
1. Приобретать клеточные линии из надежных источников, гарантирующих отсутствие микоплазм. Проводить криоконсервацию клеток на первом пассаже.
2. Осуществлять регулярный контроль контаминации (не реже 1 раза в месяц). Контаминированные линии по возможности уничтожать.
3. Применять карантинное отделение клеточных линий, не проверенных на микоплазмы, и особенно тех клеточных линий, в которых микоплазмы обнаружены. С такими культурами необходимо работать в отдельных боксах. В случае, если это невозможно, не использовать один и тот же флакон со средой для культивирования и контаминированных, и чистых линий; заранее разливать среды и сыворотки небольшими объемами.
4. По возможности для культивирования клеток применять питательные среды без антибиотиков.
5. Тщательно проверять все ингредиенты сред и рабочие растворы (особенно сыворотки) на контаминацию микоплазмами.
6. При пересеве клеток сначала разливать свежую питательную среду по чистым флаконам, а затем сливать культуральную среду из флаконов с клеточными культурами. Разливать среды и суспензии клеток не через край, а только с помощью пипеток. Использованные пипетки помещать в стакан с 3%-ным раствором хлорамина или карболовой кислоты, а культуральную жидкость сливать в стакан с дезинфицирующим раствором.
7. После работы проводить тщательное дезинфицирование (растворами хлорамина, карболовой кислоты или 70%-ным этанолом) рабочей поверхности стола, боковых стенок бокса и всех предметов, находящихся в боксе. Регулярно (ежемесячно) контролировать чистоту внутренних поверхностей СO2-инкубаторов. Ввести строгие меры контроля чистоты помещений, находящихся рядом с боксом.
Смотрите также:
