Микоплазмы: деконтаминация: с амфипатическими пептидами
Совсем новый подход к проблеме деконтаминации клеточных культур (еще не до конца разработанный, но представляющийся перспективным) состоит в использовании природных или синтетических амфипатических пептидов, обладающих выраженным бактерицидным и цитотоксическим действием. Биологическую активность пептидов связывают с их способностью формировать ионные каналы в клеточных мембранах или образовывать кластеры на поверхности мембраны, что приводит к изменению мембранного потенциала и повышению проницаемости, губительному для клетки. Антимикробное действие амфипатических пептидов (валиномицина, грамицидина, маганина, мелитина и др.) показано, в частности, на нескольких видах микоплазм ( Beven, Wroblewski, 1997 ).
Мелитин представляет собой линейный немодифицированный пептид (26 аминокислот), выделенный из пчелиного яда ( Habermann, 1980 ). При высоких концентрациях мелитин вызывает лизис мембран эукариотных клеток, поэтому его непосредственное применение для деконтаминации клеток in vitro или для борьбы с микоплазменными инфекциями in vivo, по-видимому, нецелесообразно. Предполагаемая возможность применения мелитина состоит в использовании рекомбинантных конструкций, содержащих ген этого пептида, с обеспечением селективной экспрессии продукта в клетках- мишенях - микоплазмах.
В работе Н. M. Александровой с соавторами ( Александрова и др., 2001 ) разработаны и апробированы генетические конструкции, содержащие ген мелитина и экспрессирующие его после введения соответствующих рекомбинантных плазмид в клетки микоплазмы M. hominis. Селективность экспрессии мелитина в клетках микоплазм достигается благодаря тому, что в синтетическом гене мелитина для кодирования триптофана был использован кодон TGA, который в клетках эукариот, как известно, является стоп- кодоном, поэтому образование активного пептида в эукариотных клетках не происходило. В качестве векторов модифицированного гена мелитина авторы применили рекомбинантные плазмиды, содержащие конъюгативный транспозон Тп91б. Это позволило осуществить эксперименты по регулируемой экспрессии гена мелитина в системе, где индукторами служили антибиотики тетрациклинового ряда в низких концентрациях, а также адресную доставку этих плазмид в клетки микоплазм благодаря их способности акцептировать Тn91б в процессе становления устойчивости к тетрациклинам.
Смотрите также:
