MSUD.Строение гена E1 альфа BCKDH комплекса
Ген E1 альфа субъединицы дегидрогеназы кетокислот с разветвленной цепью
В 1988 году была клонирована кДНК человека гена E1 альфа субъединицы дегидрогеназы кетокислот с разветвленной цепью ( Zhang B.,1988 ). кДНК размером 1552 пар оснований была выделена из библиотеки кДНК печени человека. Данная кДНК содержала откры- тую рамку считывания размером 1134 пар оснований, кодирующую 378 аминокислот, и 3' нетранслируемую последовательность из 418 пар оснований. При сравнении выделенной кДНК человека с ранее выделен- ной кДНК крысы ( Zhang B.,1987 ) выяснилось, что выделенный клон кДНК человека не содержит 24 триплета, кодирующие аминокислоты с N конца, а также последовательность, кодирующую лидерный пептид (leader peptide). На основе нуклеотидной последовательности кДНК человека была выведена аминокислотная последовательность Е1 альфа субъединицы дегидрогеназы кетокислот с разветвленной цепью. В этой же работе было показано, что размер мРНК E1 альфа субъедини- цы дегидрогеназы кетокислот с разветвленной цепью равен 1,8 kb.
В 1989 году Fisher ( Fisher C.W.,1989 ) проклонировал пол- ную нуклеотидную последовательность кДНК E1a субъединицы дегидро- геназы человека. Выделенный клон кДНК состоял из 1783 пар основа- ний, кодирующих 400 аминокислотных остатков.
В 1991 году был клонирован ген E1а субъединицы дегидроге- назы кетокислот с разветвленной цепью человека ( Dariush N.,1991 ). Однако, в данной работе выделенный клон, также как и в предыдущей работе, не содержал 5' нетранслируемую область гена. Нуклеотидная последовательность 5'конца гена была проклонирована и более полно охарактеризована в работах McKean M.C. и Chuang J.L ( McKean M.C.,1992 ; Chuang J.L.,1993 ).
Ген E1 альфа субъединицы дегидрогеназы протяженностью около 55 килобаз состоит из 9 экзонов. В таблице 25 ( Таблица 25 ) пред- ставлены экзон-интронные сочленения данного гена. Девять экзонов данного гена кодируют аминокислотную последовательность пре-E1 альфа субъединицы из 445 аминокислотных остатков. На Рис. 19 представлена нуклеотидная (мРНК) и аминокислотная последовательности Е1 альфа суъединицы дегидрогеназы.
Экзон 1 (135 bp) содержит три инициирующих сайта транскрип- ции в положениях +1, +18, +22 (на Рис. 19a данные сайты обозначены *). Секвенирование 5'фланкирующей области гена показало отсутствие ка- нонических TATA боксов. В 5'области выявляются множественные копии CAAT боксов в положениях от -196 до - 205 и от -377 до -369, а также три SP1 связывающих сайта (GGGCGG) в позициях нуклеотидов от -320 до -325, от -864 до -859, от -1290 до -1295; три AP2 связыва- ющих сайта (CCCCAGGC) в положениях нуклеотидов от +149 до +156 (ин- трон 1), от +115 до +122 (экзон 1) и от -228 до -235. В 5' области выявляются также три FSE-1 элемента в положениях от -214 до -203, от -294 до -283, и от -392 до -404; две копии FSE-2 элемент а в положениях от +189 до +202 (интрон 1) и от -116 до -127. В 5' об- ласти выявляются также множественные копии GRE и cAMP ( CRE ) элемен- тов, а также многие копии прямых (DR) и инвертированных (IR) повто- ров . С помощью делеционного анализа были выявлены промоторные облас- ти гена в позиции нуклеотидов от -320 до -115 в случае экспресии ге- на в клетках человека Hep-G2 и в позиции от -115 до -909 в случае транскрипции гена в клетках хомяка CHO, что вероятно отражает специ- фическую дифференциацию промоторной функции гена относительно видо- вой принадлежности клеток. В положении выше нуклеотида (- 320) на- ходится ингибитор промоторной активности гена. На Рис. 19a представ- лена 5'фланкирующая область гена.
В настоящее время клонированы кДНК E1a субъединицы дегидро- геназы кетокислот с разветвленной цепью крысы ( Zhang B.,1987 ), быка ( Hu C.W.C.,1988 ), на основе которых выведены аминокислотные последовательности.
Смотрите также:
