Ник-трансляция (смещение разрыва) (nick-translation)
Ник-трансляция (смещение разрыва) (nick-translation) [англ. nick — щель, разрыв и лат. translatio — передача] — метод получения меченых зондов, основанный на замене нуклеотидов в двухцепочечной ДНК радиоактивно или и флуоресцентно мечеными нуклеотидами с помощью ДНКазы I (см. Дезоксирибонуклеаза, ДНКаза), которая способна вносить разрывы в ДНК, и полимеразной активности, свойственной ДНК-полимеразе I (см. ДНК-полимераза I). Для этого первоначально создаются разрывы в немеченой молекуле ДНК путем частичного вырезания нуклеотидов при помощи ДНКазы I с образованием свободных 3'-ОН-концов. Затем добавляется ДНК-полимераза I, которая начинает реакцию репликации с 3'-ОН-конца каждого разрыва и одновременно удаляет нуклеотиды с 5'-стороны (благодаря присущей ДНК-полимеразе I 5'-3'-экзонуклеазной активности). При добавлении в реакционную среду одного какой-либо меченого дезоксирибонуклеозидтрифосфата в процессе полимеразной реакции происходит замещение исходных нуклеотидов в двухцепочечной ДНК на радиоактивно меченные. Метод Н.-т. широко используется для создания меченых зондов, используемых в экспериментах по гибридизации нуклеиновых кислот. См. также Ник, одноцепочечный разрыв.
Смотрите также:
