Шаговая ПЦР целевого гена
Шаговая ПЦР целевого гена (targeted gene walking polymerase chain reaction, греч. polymeres — состоящий из многих частей, многообразный; лат. re- — приставка, обозначающая повторность действия, и actio — действие; греч. genos — род, происхождение) -вариант обычной ПЦР), используемый для амплификации неизвестной нуклеотидной последовательности ДНК, локализованной вверх или вниз (слева или справа) от известной последовательности нуклеотидов. Для этого первый специфический ПЦР-праймер (целевой праймер, т. е. праймер, комплементарный экзону) и второй специфический праймер (внутренний праймер, гибридизующийся с той же нитью ДНК и расположенный близко к сайту целевого праймера) отжигают (гибридизуют) с их целевыми сайтам (мишеням) в геноме. Затем неспецифические, т. н. «шагающие» праймеры, комплементарные нуклеотидным последовательностям, расположенным выше или ниже мишени и сайта связывания внутреннего праймера, используют для амплификации расположенных между ними районов с помощью TaqI ДНК-полимеразы. Эту технику можно применять для выделения нуклеотидных последовательностей, прилежащих к уже известным районам без процедуры их клонирования, а также для ДНК-фингерпринтинга, обнаружения регуляторных районов и др.
Смотрите также:
