Теломеразные каталитические компоненты у млекопитающих
В 1996 г. Лингнер и Чех опубликовали сообщение о выделении высокоочищенной теломеразы из ресничных инфузорий Еuрlotes . Впоследствии ими были определены аминокислотные последовательности пептидов, полученных из ранее выделенной теломеразы, и клонирован ген, названный р123 , кодирующий один из компонентов теломеразы Euplotes [ Limner, ea 1997 ]. Существенно, что предсказанная на основе кДНК белка р123 аминокислотная последовательность содержит мотивы, консервативные для различных типов обратных транскриптаз , произошедших от ретровирусов и ретротранспозонов. Поскольку теломераза является разновидностью обратной транскриптазы, синтезирующей теломерную ДНК с использованием собственной внутренней матричной РНК, эти данные позволяют предположить, что клонированный ген действительно кодирует каталитическую субъединицу теломеразы Euplotes. В это же время была идентифицирована и клонирована коллекция генов EST1-4 дрожжей (Ever Shorter Telomeres). у которых мутанты демонстрировали прогрессирующее укорочение теломерных участков [ Lendvay, ea 1996 ]. Определение нуклеотидных последовательностей генов выявило значительную степень гомологии между EST2 и р123. Аминокислотная последовательность EST2 содержит все мотивы, консервативные для обратных транскриптаз и р123. Более того, существуют дополнительные участки аминокислотных последовательностей, консервативные только в пределах р123 и EST2, но не для других типов обратной транскриптазы. Теломеразная активность блокировалась при мутагенезе консервативной аминокислоты in vitro и замене гена EST2 мутировавшими генами. Отсюда был сделан вывод, что гены p123 и EST2 кодируют каталитическую субъединицу у теломераз Euplotes и почкующихся дрожжей соответственно [ Limner, ea 1997 ]. Скорость усиления потока информации, поступающей в процессе осуществления программы секвенирования генома человека, огромна. В то самое время, когда была опубликована статья о p123/EST2, человеческий клон EST, обладающий гомологией с р123, был представлен в базу данных банка нуклеотидных последовательностей EST. Данные о клонировании полноразмерной кДНК этого гена человека были опубликованы независимо туг от друга группами Чеха и Вейнберга [ Nakamura ea 1997 , Meyerson, ea 1997 ] Эти гены теломеразной обратной транскриптазы сейчас принято обозначать TRT (Telomerase Reverse Transcriptase). Экспрессия TRT человека ( hTRT ) коррелировала с теломеразной активностью в клетках, содержащих и не содержащих теломеразу. Более того, когда культура клеток человеческой лейкемии линии HL60 была введена в стадию дифференцировки, а затем подвергнута апоптозу путем обработки ретиноевой кислотой , экспрессия TRT значительно снижалась в результате негативной регуляции с одновременным снижением теломеразной активности [ Meyerson, ea 1997 ].
Накамура и Чех также идентифицировали ген TRT у делящихся дрожжей Schizosaccharomyces pombe (SpTRT) [ Nakamura, ea 1997 ]. Таким образом, гены TRT консервативны у трех сильно дивергировавших групп эукариот: дрожжей, ресничных инфузорий и многоклеточных.
Смотрите также:
