Генная модификация с помощью векторов внедрения (0 векторов)
Модификацию можно осуществлять не только путем замещения, но и путем внедрения в требуемый ген чужеродной ДНК таким образом, что сам изменяемый ген остается в составе генома. Это осуществляется с помощью векторов внедрения или, как их иногда называют 0-векторов , схема которых показана на рис 7В . Вектора внедрения используют не двойной, как вектора замещения, а одинарный акт рекомбинации. Рис 7В показывает схемы направленной модификации с помощью внедрения.
Отметим основные отличия этой схемы.
Во-первых, вектор представляет собой линейную молекулу, которую можно получить, если замкнуть в ковалентный цикл линейный вектор замещения, изображенный на рис. 7А , а затем разрезать его между экзонами 6 и 7.Тогда при гомологичной одноактной рекомбинации получится структура, изображенная в нижней части рисунка. Чтобы понять, как она получилась, просто проследите глазами за ходом рекомбинации, показанным черточками, ведущими от геномной ДНК к векторной. Начали с геномной ДНК. С ее левой части. Движемся от экзона 1 к 2 к 3 ....6, следуем вдоль линии рекомбинации вверх к экзону 7 вектора, движемся вдоль векттора к гену neo, к экзону 9, 6, вдоль линии рекомбинации вниз к экзону 7 геномной ДНК, ее экзонам 7, 8 и 9. Поняли, что произошло? В полученной рекомбинавнтной ДНК часть последовательностей гена после рекомбинации оказалась в двойном количестве.
В результате и замещения и внедрения происходит инактивация гена, в котором произошла рекомбинация. Возникает так называемая нуль-мутация , т.е. мутация, в результате которой ген инактивируется. Другой термин, который широко использутся для обозначения направленной инактивации гена нам уже знаком- нокаут. В данном случае задача нокаута была облегчена особенностями гена- мишени, о которых шла речь выше.
Но как поступать в общем случае, когда ген мишень не позволяет осуществлять селекцию и когда он в двойном количестве в геноме? Для этих случаев также разработана специальная система негативной селекции .
Смотрите также:
