Таргетинг: сопутствующие геномные перестройки
Следует отметить, что иногда таргетинг гена сопровождается дополнительными мутациями в области гомологичной рекомбинации. Так, при таргетировании гена hprt в ЭС-клетках мыши была обнаружена маленькая делеция по соседству с одним из сайтов рекомбинации ( Doetscman T., ea., 1988 ). В работе ( Soriano P., ea., 1991 ) были выявлены дупликации и трипликации последовательностей, фланкирующих таргетированный ген src. При этом обнаружили несколько копий гена neo, присутствующего в векторе. Подобные геномные перестройки имеют место и при негомологичной рекомбинации, что, вероятно, обусловлено ошибками ферментативных систем, обеспечивающих рекомбинацию ( Тарантул В. З. , и др. 1989 ). Однако такие события, по-видимому, достаточно редки, чтобы мешать использованию гомологичной рекомбинации для таргетирования генов.
Тем не менее отдельные случайные модификации могут оказаться полезными для экспериментаторов. Так, C.Moens и соавт .( Moens C.B., ea., 1992 ) при проведении гомологичной рекомбинации вектора замещения с геном N-myc случайно получили инсерцию фрагмента вектора с беспромоторным геном neо в интрон гена N-myc. За счет альтернативного сплайсинга с мутантным тьранскриптом в таргетированных клетках образовалось небольшое количество нормального транскрипта. Таким образом, был предложен еще один путь для таргетинга - создание мутантов с частичной потерей функции. Этот путь расширяет возможности изучения функции генов, особенно связанных с развитием организмов.
Смотрите также:
