Методы замораживания-высушивания вирусов
Вирус адсорбируют на гидрофилизированную формвар-углеродную подложку, покрывающую ЭМ-сеточку, либо на небольшой кусочек свежесколотой слюды. Затем удаляют избыток жидкости фильтровальной бумагой и замораживают материал в жидком азоте. Сеточки или слюду с замороженным монослоем вируса помещают в вакуумную камеру на металлический столик, предварительно охлажденный до -150*С. Камеру откачивают до давления 10 торр, устанавливают температуру столика -80*С, помещают над ним охлажденный до -150*С металлический экран и лиофильно высушивают образец. Если материал был предварительно контрастирован на сеточке, то его нужно немедленно просмотреть в ЭМ либо поместить в эксикатор. Материал, нанесенный на слюду, после высушивания напыляют в вакуумной камере под углом 30-45* смесью Pt/C, а затем под прямым углом - углеродом. Полученную таким образом реплику снимают на раствор сильного окислителя для удаления органики. Затем ее помещают на ЭМ-сеточку и просматривают в ПЭМ. Процедуре замораживания-высушивания можно подвергнуть суспензию либо монослой клеток с последующей их репликацией.
Смотрите также:
