Методы криоскалывания вирусов
Процедура криоскалывания состоит из следующих этапов: криофиксация; скалывание или разрыв замороженного образца; при необходимости - сублимация льда с поверхности скола (травления); получение Pt/C-реплики; очистка реплики от органических остатков. Образцы замораживают на специальных металлических столиках со скоростью, при которой эффективно блокируется кристаллизация внутриклеточной воды. В ряде случаев необходимо применять криопротектор, например глицерин. Затем образец помещают в вакуумную камеру на охлажденный столик. Скол проводят металлическим ножом, охлажденным до температуры жидкого азота (-196*С). Если необходимо травление, то температуру образца понижают до -100*С. После сублимации льда с поверхности скола в вакууме (10 торр) следует этап получения реплики. Разрешение этого метода достигает 10-15 Е.
Смотрите также:
