Негативное контрастирование
Если вирионы вирусов или отдельные белковые молекулы находятся в тонком слое дисперсного вещества высокой плотности, то при прохождении электронного пучка микроскопа через них на экране возникает изображение светлого объекта на темном фоне - негативное контрастирование. Несмотря на то что были апробированы для этой цели различные соли тяжелых металлов, широкое распространение па практике получили только две: фосфорно-вольфрамовая кислота (ФВК) и уранилацетат . Водные растворы фосфорно-вольфрамовой кислоты в пределах 2% и 1-2% урапилацетата в 70% метаноле дают идеальный негативный эффект при контрастировании вирионов вирусов, если соблюдены следующие условия:
1) чистота вирусной суспензии от сопутствующих выделению и очистке органических и неорганических соединений (цезия хлорид, сахароза и т.д.);
2) гидрофильность пленки подложки.
Необходимо отметить, что обычно имеет место два типа негативного контрастирования вирусных вирионов: когда контрастирующий раствор только окружает объект, образуя тонкую пленку на его поверхности, и когда частично проникает внутрь. В том и другом варианте происходит наложение изображения от двух сторон (верхние и нижние поверхности полусфер) вириона, что мешает получить истинное изображение. Однако часто можно найти вирионы, контрастирование которых происходит таким образом, что контрастность одной полусферы резко превышает контрастность другой, и тогда можно говорить об истинном изображении.
Уранилацетат обладает сродством к нуклеиновым кислотам и часто дает позитивно-негативный эффект. В случае, когда гидрофильность подложки недостаточна, происходит только позитивный эффект - окрашивание внутривирионных нуклеиновых кислот.
Смотрите также:
