Бешенство: диагностика
В начале заболевания уровень гемоглобина и биохимический анализ крови остаются в норме; изменение лабораторных показателей наблюдается при развитии осложнений ( дисфункция гипоталамуса , желудочно-кишечное кровотечение , другие). Содержание лейкоцитов обычно слегка повышено (12000-17000 в мкл), но может быть как нормальным, так и резко увеличенным (до 30000 в мкл).
Лабораторная диагностика бешенства включает:
- выделение возбудителя из биологических жидкостей (слюны, изредка - СМЖ) и тканей (головной мозг);
- серологические исследования;
- определение вирусных антигенов в тканях (мазках-отпечатках роговицы, биоптатах кожи, головном мозге);
- выявление вирусной РНК с помощью ПЦР.
Образцы ткани головного мозга, полученные при патологоанатомическом исследовании либо с помощью биопсии, используют для:
- заражения мышей с целью выделения вируса;
- иммунофлюоресцентного окрашивания на вирусные антигены;
- гистологического или электронно-микроскопического исследования для поиска телец Негри ;
- выявления вирусной РНК методом ПЦР с обратной транскрипцией.
Диагностика бешенства бывает прижизненной и посмертной. Прижизненная диагностика базируется на детекции антигена N-белка и РНК в криостатных срезах кожи (волосяного мешка) и РНК в моче методами МФА и ОТ-ПЦР ; выделение вируса in vitro и in vivo, а также РНК в образцах слюны, слезах и СМЖ; определение антител в крови невакцинированных пациентов и в СМЖ независимо от полученной вакцинации или без нее. Эффективность прижизненной диагностики низка и варьирует в пределах 0-45%. Поэтому перечисленные выше методы повторяются до установления диагноза. Посмертная диагностика высокоэффективна и основывается на детекции вируса антигена и генетического материала в головном мозге.
Выделение вируса и иммунофлюоресцентное окрашивание - достаточно надежные и чувствительные методы диагностики, однако при затяжном течении болезни они могут дать ложноотрицательные результаты из-за высокого титра нейтрализующих антител в крови и СМЖ. Поставить прижизненный диагноз бешенства помогает иммунофлюоресцентное окрашивание биоптатов кожи, мазков-отпечатков роговицы и мазков слюны. Результаты этого исследования должны быть подтверждены серологическими методами либо обнаружением самого вируса, его антигенов или РНК в ткани головного мозга.
У невакцинированных больных диагноз бешенства подтверждает четырехкратное повышение титра нейтрализующих антител при исследовании парных сывороток. У вакцинированных больных при постановке диагноза опираются на абсолютный уровень нейтрализующих антител в сыворотке, а также на присутствие этих антител в СМЖ. После проведения постэкспозиционной профилактики нейтрализующие антитела в СМЖ обычно не появляются либо их титр низок (менее 1:64), в то время как при бешенстве титр нейтрализующих антител в СМЖ колеблется от 1:200 до 1:160000.
К "золотому стандарту" относятся два метода выделения вируса in vivo и in vitro, а также выявление нуклеопротеина прямым методом флюоресцирующих моноклональных антител. Наивысшей чувствительностью обладают молекулярные методы исследования: ОТ-ПЦР и секвенирование генов N-белков и G-белков . Однако ОТ-ПЦР не рекомендуется для рутинной диагностики бешенства из-за возможности получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Секвенирование генов N- и G-белков используется для классификации вирусов по генотипам, филогенетическим группам и идентификации вариантов вируса, циркулирующих в определенной географической зоне или хозяине.
Клинически бешенство мало отличается от других вирусных энцефалитов . Важнейший диагностический признак - данные анамнеза, свидетельствующие о возможности заражения. Дифференциальный диагноз, кроме того, должен включать лиссофобию , синдром Гийена-Барре , полиомиелит и поствакцинальный энцефаломиелит . Последний чаще всего возникает при использовании мозговых антирабических вакцин и обычно развивается спустя 1-4 нед после вакцинации.
Смотрите также:
