Prep-ISH: гибридизации in situ: препаративная
Суть метода [ Hozier J. e. a., 1994 ] заключается в следующем: к молекулам ДНК, среди которых необходимо отобрать те, которые происходят из данного участка хромосомы, пришивают синтетические адапторы и проводят амплификацию . Амплифицированный материал используют в качестве зонда для гибридизации in situ. Затем препарат хромосом, на котором проводилась гибридизация, окрашивают и под микроскопом вырезают нужную полосу. Последующая амплификация с исходными праймерами позволяет получить те молекулы из исходной смеси, которые гомологичны ДНК данного участка хромосомы.
Одной из главных проблем в этом методе является обеспечение равномерной амплификации возможно большего числа молекул из исходной смеси. Для этого авторы использовали адапторы Uni-Amp , поставляемые фирмой Clontech Inc. Контрольные опыты показали, что при использовании этих адапторов не происходит заметного уменьшения сложности библиотек кДНК.
Очевидно, этот метод может иметь множество применений в исследовании экспрессии генов, создании транскрипционных карт определенных районов хромосом, карт контигов и так далее.
Смотрите также:
