Тест Эймса
Принцип метода основан на выращивании мутантных ауксотрофных бактериальных клеток в присутствии исследуемого вещества. Ауксотрофными называют мутантные клетки, неспособные расти на минимальной питательной среде без добавок метаболита, биосинтез которого нарушен в результате мутации. В классическом тесте Эймса чаще всего используют клетки Salmonella typhimurium , ауксотрофные по аминокислотам (в частности Trp), ауксотрофность которых возникает в результате единственной точковой мутации. Суспензию бактерий инкубируют в присутствии исследуемого вещества и высевают на твердую питательную среду, содержащую минимальное количество вещества, по которому бактерии ауксотрофны. Вещества должно быть достаточно для того, чтобы клетки смогли совершить несколько делений, не образовав видимых колоний. Образующиеся мутации фиксируются в геноме бактерий. Когда возникают реверсии в локусе, определяющем ауксотрофность, бактерии начинают расти без добавок, образуя видимые колонии. Таким образом, если испытуемое вещество обладает мутагенным действием, эффективность образования ревертантов в его присутствии будет значительно выше, чем без него, что проявляется в виде множества бактериальных колоний, вырастающих на твердой питательной среде в отсутствие пищевой добавки.
Имеется большое количество модификаций теста Эймса. Наиболее важной является использование микросомных фракций печени грызунов для активации промутагенов. Микросомные фракции печени содержат все основные ферменты метаболической активации ксенобиотиков , поэтому, если испытуемое вещество обладает промутагенной активностью, оно активируется ферментами микросом in vitro, и такой результат легко выявляется в тесте Эймса.
Смотрите также:
