MCA метод
(Methilation CpG island modification) Метод основанный на ПЦР , позволяющий избирательно амплифицировать CpG-островки , дифференциально метилированные в нормальных и опухолевых клетках [ Toyota. ea 1999 ]. ДНК вначале обрабатывают рестриктазой SmaI (сайт узнавания CCCGGG не расщепляется, если он содержит 5-метилцитозин), которая дает фрагменты с тупыми концами. Метилированные сайты CCCGGG затем расщепляются рестриктазой ХтаI, которая формирует фрагменты с липкими концами. Именно последние способны взаимодействовать с адаптерами и быть амплифицированными в последующей ПЦР. В сочетании с методом репрезентативного дифференциального анализа (RDA) [ Lisitsyn, ea 1993 ] этот подход позволяет избирательно амплифицировать CpG-островки, аберрантно метилированные в опухолевых клетках . Таким способом в клетках рака толстого кишечника были идентифицированы и клонированы 33 последовательности, включая фрагменты известных генов (РАХ6, Versican, alfa-tubulm, CSX, OPT и др.).
Смотрите также:
