Mts1-белки: взаимодействие с ТЦНМ
Первый подход заключался в использовании метода иммунопреципитации моноклональными антителами к Mts1 клеточного экстракта, меченного 358-метионином. Среди белков преципитата наиболее представленной является тяжелая цепь немышечного миозина (ТЦНМ) . Она была идентифицирована с помощью специфических антител. ТЦНМ взаимодействует с Mts1 in vitro, и связывание зависит от присутствия ионов кальция. Кроме того, при двойной окраске клеток антителами к ТЦНМ и к Mtsl наблюдается полное совпадение их локализации [ Kriajevska M.V. et al., 1994 ].
Чтобы подтвердить значение этого взаимодействия in vivo, были проведены опыты по определению участка ТЦНМ, взаимодействующего с Mts1 . Для этого генно-инженерным путем получали различные фрагменты ТЦНМ и определяли, какие из них связываются на фильтре с Mts1 (методом сэндвича). Связывание происходит только с С-концевым фрагментом ТЦНМ размером 200 аминокислотных остатков. Для уточнения места связывания были получены делеции. С их помощью показано, что участок связывания занимает отрезок от 1909-го до 1937-го аминокислотного остатка, считая от N-конца. В этом районе в позиции 1917 находится серин, который способен фосфорилироваться протеинкиназой С, причем это фосфорилирование играет важную роль в функционировании ТЦНМ в клетке [ Kriajevska M. et al., 1998 ].
В опытах in vitro добавление Mts1 к ТЦНМ избирательно подавляло именно фосфорилирование серина-1917 [ Kriajevska M. et al., 1998 ]. Таким образом, взаимодействие Mts1 с ТЦНМ, вероятно, имеет функциональный характер. Можно предположить, что блокировка фосфорилирования серина-1917 в ТЦНМ приводит к изменению подвижности клеток, в регуляции которой ТЦНМ играет существенную роль.
Взаимодействие с Mts1 может также влиять на растворимость ТЦНМ . Вышеописанный фрагмент в 200 аминокислотных остатков, подобно полноразмерному ТЦНМ, не растворим в 0.15 М солевых растворах. Однако, добавление к осадку белка Mts1 приводит к полному его растворению. Это дополнительно подтверждает, что ТЦНМ является одной из мишеней действия Mts1.
Смотрите также:
