C-myc: Ауторегуляция позитивная
Белок Myc как таковой может стимулировать транскрипцию своего собственного гена, связываясь с районом, находящимся на 2 т.н.п. выше 1 экзона c-myc ( Ariga H. et al., 1989 ). С помощью футпринта с ДНКазой I точно идентифицировано место связывания белка myc из ядерных экстрактов клеток лимфомы Беркитта Raji ( рис.4 ). 20 нуклеотидов - от -1865 до -1845 оказались защищенными. Опыты по торможению в геле с меченными олигонуклеотидами, соответствующими этому району и серией олигонуклеотидов с делециями разной длины, показали, что минимальный необходимый для связывания белка участок ТСТСТТА (-1865/-1845).
При этом получается три специфических комплекса, a, b и c. Предобработка лизата анти-Myc антителами приводила к исчезновению эффекта. С помощью Southern-Western блоттинга, при котором нитроцеллюлозные фильтры с электрофоретически разделенным лизатом клеток Raji обрабатывают параллельно анти- Myc антителами и меченным двуспиральным олигонуклеотидом, показано совпадение молекулярных масс белков (65 кДа), связывающихся с данной последовательностью ( Ariga H. et al., 1989 ). Кроме того, в дальнейших опытах очищенный белок c-Myc связывался с соответствующим олигонуклеотидом ( Iguchi-Ariga S.M.M. et al., 1988 ).
Плазмида, содержащая последовательность (-1865/-1845), так же как и целый ген c-myc, может автономно реплицироваться при трансфекции в клетки HeLa . Следовательно, этот участок содержит точку начала репликации . Кроме того, из исследования транскрипционной активности химерных конструкций с гетерологичным промотором, содержащих этот участок, выяснилось, что эта область обладает свойствами транскрипционного энхансера ( Ariga H. et al., 1989 ).
Таким образом, участок гена c-myc -1865/-1845 является энхансером, связывает белок Myc и служит точкой начала репликации.
Состав комплексов, наблюдаемых в экспериментах по торможению в геле с меченными олигонуклеотидами, соответствующими участку -1865/-1845, до конца не ясен. Они могут быть образованы гетеро- и гомобелковыми комплексами с белком Myc.
В С-концевой части белка Myc есть структуры, напоминающие так называемые "лейциновые молнии" - гидрофобные поверхности альфа-спиралей, содержащие 4 - 5 лейциновых остатков, разделенных участками из 7 аминокислотных остатков. Показано, что они принимают участие в образовании мультимеров белка Myc in vivo ( Dang C.V. et al., 1989 ). Таким образом, белок Myc способен, вероятно, образовывать гетеро- и гомобелковые комплексы и их может быть более одного. По-видимому, фосфорилированное состояние способствует образованию таких комплексов ( Ziff E.B., 1990 ).
Вообще говоря, для различных семейств транскрипционных факторов характерна регуляция с помощью связывания двойных комплексов ( fos/lun , fos b/jun b , jun d /fra I или CREB/CREB , ATF2/ATF3 , ATF1/ATF1 ( Ziff E.B., 1990 ), причем связывание между факторами также может осуществляться с помощью "лейциновых молний".
Возможно, что белок Myc является позитивным транскрипционным фактором, усиливающим транскрипцию собственного гена и, возможно, участвующим в процессе репликации. Позитивная регуляция транскрипции гена c-myc осуществляется с помощью различных регуляторных участков, находящихся в 5'-области гена. Их действие может суммироваться, кроме того, различные регуляторы могут включаться или выключаться в зависимости от состояния клетки, тем самым становится понятной необходимость существования многих регуляторных участков в гене c-myc.
Смотрите также:
