p53: ацетилирование и связывание с ДНК
Первые попытки обращения к значению ацетилирования p53 привели к использованию проторенного пути изучения ДНК-связывающих свойств p53 с использованием анализа изменения электрофоретической подвижности ( EMSA ). С помощью этого метода измеряется способность p53 связываться с короткими олигонуклеотидами, содержащими последовательность одного из нескольких известных p53-связывающих сайтов . С помощью этого подхода было показано, что ацетилирование p53 по участкам COOH- или линкерных областей стимулирует его способность к связыванию ДНК ( Gu и Roeder, 1997 ; Sakaguchi и др., 1998 ; Espinosa и Emerson, 2001 ).
Это наблюдение согласуется с результатами множества более ранних исследований, показавших, что фосфорилирование, связывание антител или удаление C-конца, как показано при помощи EMSA, стимулирует специфическое ДНК-связывание p53. В результате этих наблюдений было принято, что C-конец p53 функционирует в качестве негативного регулятора специфической ДНК-связывающей активности центрального домена. Эта гипотеза была, однако, недавно подвергнута сомнению Espinosa и Emerson, 2001 , показавшими, что, хотя ацетилирование p53 посредством p300 может стимулировать его способность к связыванию коротких нуклеотидов, содержащих участок связывания промотора p21, оно не оказывает влияния на связывание белком p53 сайтов промотора p21, находящихся в составе намного более длинной молекулы ДНК. Более того, этими авторами было также показано, что p53 с удаленным C- концом в сущности, обладает меньшей эффективностью при взаимодействии с промотором, находящимся в составе как депротеинизированной ДНК, так и ДНК хроматина.
Используя более физиологичный анализ, Эспиноза и Эмерсон не только подвергли критике устоявшееся утверждение о том, что C-конец p53 играет роль аутоингибитора, но также выдвинули предположение о том, что ацетилирование не оказывает существенного влияния на взаимодействие p53 с ДНК. Согласуются с этим заключением и результаты экспериментов Barlev и др. (2001) , использовавших метод иммунопреципитации хроматина (ChIP) для сравнения p53 "дикого типа" с p53, содержащим несколько мутантных сайтов ацетилирования (K320R, K373R, K381R, K382R) и показавших, что обе формы p53 связываются с промотором p21 клеток U20S с одинаковой эффективностью. Принимая во внимание эти и другие исследования, в настоящее время следует признать сомнительным тезис о том, что ацетилирование p53 обладает существенным влиянием на его связывание с участками промоторов генов-мишеней, таких, как p21.
Смотрите также:
