MECP2-Ген: мутации, методы определения
Основным методом определения мутаций в гене МЕСР2 является метод секвенирования кодирующей области и фланкирующих интронных последовательностей. Этот метод является наиболее распространенным для определения генных мутаций, хотя имеет ряд недостатков, среди которых трудоемкость и высокая стоимость.
Помимо этого, предлагается использовать метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с предварительной денатурацией ДНК для качественной оценки последовательности гена МЕСР2 и разделения исследуемого участка от геномной ДНК с последующим прямым секвенированием ( Buyse et al., 2000 ). Данный метод обладает рядом преимуществ: более точное определение последовательности и быстрое определение крупных перестроек последовательности гена МЕСР2 (делеций), но за счет использования дополнительного физико-химического метода требует больших финансовых затрат и времени.
Наличие восьми рекуррентных мутаций в гене МЕСР2 ( R160W , R133C , Т158М , R168X , R255X , R270X , R294X , R306C ) позволяет использовать энзиматический тест (enzymatic testing) на наличие данных мутаций: амплификация определенного участка гена МЕСР2 с последующей рестрикцией сайта, где возможно расположена мутация ( Bourdon et al., 2001а ; Laccone et al., 2001 ). Этот метод является более дешевым и требует меньших временных затрат по сравнению с секвенированием ( Bienvenu et al., 2002 ).
Поскольку общий процент рекуррентных мутаций составляет около 65% ( Miltenberger-Miltenyi, Laccone, 2003 ), а мутации МЕСР2 встречаются у 70-90% ( Shahbazian, Zoghbi, 2001 ) больных RTT , этот метод позволяет идентифицировать мутации у 40-60% больных RTT, что является исключительно полезным при диагностике RTT в клинической практике.
Литературные данные о мутациях гена МЕСР2 свидетельствуют о том, что данная аномалия не обнаруживается у 10-35% детей с RTT, в связи с чем, предлагается поиск новых биологических маркеров для диагностики этого заболевания ( Юров, Ворсанова, 2001 ).
Поскольку ген МЕСР2 участвует в эпигенетическом контроле экспрессии генов, одним из направлений решения задачи поиска причинно- следственной связи генетических аномалий и клинической картины, а также диагностики RTT является изучение такого эпигенетического феномена как инактивация хромосомы X при данном заболевании ( Ворсанова и др., 1999а ; Shahbazian et al., 2002 ; Shahbazian, Zoghbi, 2002 ).
Смотрите также:
