Позитивно-негативная селекция (positive-negative selection)
Позитивно-негативная селекция (positive-negative selection) [лат. positivus — положительный и negativus — отрицательный; лат. selectio — выбор, отбор] — методика, при которой одновременно происходит отбор клеток, несущих вставку в специфическом хромосомном сайте (позитивный отбор), и «отбраковка» клеток, несущих вставку в другом, неспецифическом сайте (негативный отбор). Применяется, напр., при селекции клонов эмбриональных стволовых клеток, в которых произошла гомологичная рекомбинация с рекомбинантным вектором в процессе «нокаутирования» гена (см. Гена нокаут). П.-н.с. обеспечивается наличием в векторе, используемом для переноса целевого гена, двух маркерных генов: позитивного селективного маркера, который позволяет проводить позитивную селекцию (обычно это ген устойчивости к неомицину или генетицину), и негативного селективного маркера, обеспечивающего негативную селекцию (чаще всего ген тимидинкиназы вируса герпеса или ген дифтерийного токсина). При внедрении вектора в геном без гомологичной рекомбинации негативный маркер сохраняется, что приводит к гибели клеток, а клетки с гомологичной рекомбинацией выживают на селективных средах.
Смотрите также:
