Трансгеноз: селекция клеток: пример: нокаут гена VCAM-1
VCAM-1 (vascular cell adhesion molecule, молекула клеточной адгезии ) представляет собой трансмембранный гликопротеин, член суперсемейства иммуноглобулинов .
Этот белок экспрессируется в сосудистом эпителии при ряде воспалительных процессов и является одним из средств мобилизации (recruitment) лейкоцитов из крови в ткань .
Ген VCAM-1 был нокаутирован стандартно с neo геном и геном тимидинкиназы для позитивно-негативной селекции . Правильность встраивания проконтролировали с помощью Саузерн-блот гибридизации
Семь эмбриональных стволовых клонов были отобраны, и далее стандартно были получены химерные мыши. Использовали скрещивание для того, чтобы отобрать черных мышей, у которых мутация оказалась в зародышевой линии клеток. Таким образом получили F1 потомство, гетерозиготное по гену vcam-1, т.е. потомство vcam-1 +/-. Фенотипически это потомство было нормальным. Для того чтобы получить гомозиготное потомство использовали инбридное скрещивание F1 гетерозиготных потомков. Оказалось, что все гомозиготные эмбрионы vcam-1 -/- к 12,5 дневному сроку после зачатия проявляли гистологически явную картину клеточной смерти и некроза тканей. Подавляющее большинство эмбрионов погибало, но некоторые (3 из 300) ухитрялись выжить и давали вполне нормальных мышей, способных к оплодотворению. Вот так все неоднозначно у живых животных. Кому то везет, несмотря даже на крайне неблагоприятные генетические обстоятельства.
Смотрите также:
