Непрямые методы лабораторной диагностики вирусных инфекций
Выделение вирусов - один из самых старых и трудоемких методов диагностики.
Серологическая диагностика , основанная на реакции антиген-антитело, может быть использована для определения как тех, так и других и играет роль в определении этиологии вирусной инфекции даже при отрицательных результатах выделения вируса.
Успех серологической диагностики зависит от специфичности реакции и соблюдения временных условий взятия крови, необходимых для синтеза организмом антител.
Рекомендуется использовать парные сыворотки крови, взятые с интервалом в 2-3 нед. Положительной реакция считается, по крайней мере, при 4-кратном нарастании титра антител. Известно, что большинство специфических антител относятся к классам IgG и IgM , которые синтезируются в различное время инфекционного процесса. При этом антитела IgM относятся к ранним и тесты, используемые для их определения, применяются для ранней диагностики (достаточно исследовать одну сыворотку). Антитела класса IgG синтезируются позже и длительно сохраняются.
Для типирования вирусов применяется реакция биологической нейтрализации (РН) , при группоспецифической диагностике, например аденовирусной инфекции , используют реакцию связывания комплемента (РСК) . Наиболее распространенными являются реакция торможения гемагглютинации (РТГА) , РСК , МФА , реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакция обратной пассивной гемагглютинации (РОПГА) , различные варианты ИФА , практически повсеместно заменившего равный ему по чувствительности РИА .
РТГА используется для диагностики заболеваний, вызванных гемагглютинирующими вирусами.
РСК является одной из традиционных серологических реакций и используется для диагностики многих вирусных инфекций. В реакции принимают участие две системы: антитела сыворотки больного со стандартным вирусом и эритроциты барана с антителами к ним, а также оттитрованный комплемент . При соответствии антител и вируса этот комплекс связывает комплемент и лизиса бараньих эритроцитов не происходит (положительная реакция). При отрицательной РСК комплемент способствует лизису эритроцитов. Недостатком метода является его недостаточно высокая чувствительность и трудность стандартизации реагентов.
РПГА - агглютинация сенсибилизированных вирусными антигенами эритроцитов (или полистироловых шариков) в присутствии антител. На эритроцитах могут быть сорбированы любые вирусы, независимо от наличия или отсутствия у них гемагглютинирующей активности. В связи с наличием неспецифических реакций сыворотки исследуются в разведении 1:10 и более.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) - агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных специфическими антителами в присутствии вирусных антигенов. Наибольшее распространение РНГА получила при выявлении HBs-антигена как у больных, так и у доноров крови.
Моноклональные антитела . Большой прогресс в диагностике вирусных инфекций достигнут в последнее десятилетие, когда с развитием генно-инженерных исследований была разработана система получения моноклональных антител. Тем самым была резко повышена специфичность и чувствительность диагностических методов определения вирусных антигенов. Узкая специфичность моноклонов, распознающих небольшую долю вирусных антигенных детерминант, которые могут не присутствовать в клиническом материале, успешно преодолевается использованием нескольких моноклональных антител к различным эпитопам .
Смотрите также:
