Идентификация вирусов
После выделения штаммов проводится их изучение и идентификация. Процесс идентификации предусматривает определение местоположения нового изолята в существующей системе классификации вирусов, т.е. определение семейства, рода, антигенной группы и взаимоотношений данного изолята с другими представителями антигенной группы. Используемые для идентификации вирусов методы можно разделить на серологические и не серологические.
Несерологические методы идентификации, проведенные на первых этапах этого процесса, позволяют получать ориентировочные сведения об изучаемом вирусе и сделать последующие исследования более целенаправленными.
Ценную информацию можно получить с помощью ЭМ-исследований , которые позволяют по морфологическим критериям отнести изучаемый вирус к определенному семейству. Важное значение имеют данные о патогенной, цитопатогенной и гемагглютинирующей активности выделенного агента, сведения о физико-химических характеристиках, включающих тип нуклеиновой кислоты, способность проходить через мелкопористые фильтры, чувствительность к жирорастворителям и детергентам. Несерологические методы исследований особенно полезны при идентификации и классификации новых для науки вирусов, нетипирующихся в серологических реакциях.
Традиционными серологическими методами идентификации вирусов являются: РСК , РТГА , РДПА (реакция диффузной преципитации в агаре) , РН , МФА и др. Необходимым условием проведения этой работы является наличие иммунных референс-сывороток или иммунной асцитной жидкости (ИАЖ) , обладающих группо- и видоспецифической активностью.
При идентификации штаммов и изучении антигенных взаимосвязей между арбовирусами , принадлежащими к различным родам, антигенным группам и комплексам, надо учитывать своеобразие ответов используемых методов. Например, в РТГА выявляются группоспецифические связи между флавивирусами (скажем, в пределах комплексов клещевого и японского энцефалита ), а для видовой дифференциации этих агентов наиболее пригодны РН и РДПА . В случае буньявирусов , относящихся к антигенным группам буньямвера и калифорнийского энцефалита , принадлежность вирусов к той или иной группе легко устанавливаются в РСК и РН , отличия между ними более выражены в РТГА .
Полная идентификация изучаемого штамма возможна при условии получения к нему гомологичной ИАЖ . Это позволяет определить характер его взаимоотношений с родственными вирусами на основе результатов двусторонних перекрестных реакций.
Приступая к работе по серологической идентификации штаммов, необходимо учитывать имеющиеся данные об их физико-химических и биологических свойствах, сведения о циркуляции известных вирусов в конкретном районе, информацию об источнике выделения и т.п.
Новые возможности в совершенствовании системы идентификации и классификации вирусов появились в результате внедрения современных методов молекулярной биологии: ПЦР , олигонуклеотидное олигопептидное картирование , секвенирование генома , точечная гибридизация , иммуноблоттинг , иммунная электронная микроскопия , моноклональные антитела .
Смотрите также:
