Термостабильная ДНК-полимераза
Термостабильные ДНК-полимеразы (thermostable DNA polymerases; греч. thermo — тепло и лат. stabilis — устойчивый) - ДНК-полимеразы, сохраняющие свою ферментативную активность при высоких температурах (до 100 °С).
Синтезируются термостабильными микроорганизмами, используются в различных вариантах ПЦР. Наиболее высокой точностью синтеза ДНК обладают термостабильные ДНК-полимеразы с 3'-5' экзонуклеазной (корректирующей) активностью, например такие, как термостабильные ДНК-полимеразы Pfu (из Pyrococcus furiosis) и Deep Vent (из Pyrococcus species GB-D). Особенно широко используемая термостабильная ДНК-полимераза Taq такой активностью не обладает.
Термостабильные ДНК-полимеразы выделяют из термофильных бактерий, температурный оптимум для полимеризации 72-84*С. Точно не установлено, к какому типу полимераз относятся термостабильные ДНК-полимеразы. Это белки, по молекулярной массе приближающиеся к 80-90 кДа. По этой характеристике данные ферменты приближаются к ДНК-полимеразам I , или к ДНК-полимеразам альфа-типа .
Термостабильные ферменты в большинстве своем обладают 5'-3'-экзонуклеазной активностью. Считают, что первая термостабильная ДНК-полимераза была выделена из штамма термофильной бактерии Thermus aquaticus YT1 ( Taq ДНК-полимераза ). Однако мало кто знает, что в 1980г. термостабильная ДНК-полимераза была описана и выделена в России С.Городецким.
Для амплификации , как правило, используется Taq ДНК-полимераза и Tth ДНК-полимераза . В настоящее время используют множество термостабильных ДНК-полимераз, которые имеют различные свойства.
Смотрите также:
