Инфекции, вызванные ВПГ-1 И ВПГ2: диагностика
Вирусологический метод является "золотым стандартом" в диагностике герпетической инфекции. Данный метод предполагает изоляцию вируса при заражении биологическим материалом чувствительных культур клеток или куриных эмбрионов с его последующей идентификацией. Для выделения вируса используют разнообразные клеточные культуры, хорионаллонтоисную оболочку 12-дневных куриных эмбрионов. ВПГ-1 и ВПГ-2 вызывают в инфицированных чувствительных клетках характерные цитопатические изменения, наблюдающиеся на 2-3-и сутки. Идентификация вируса проводится, как правило, в РН на мышах, куриных эмбрионах или клеточных культурах с использованием стандартных сывороток иммунизированных ВПГ животных.
Показанием для диагностики герпетической инфекции вирусологическим методом являются: установление этиологии инфекционного процесса при бессимптомном и хроническом рецидивирующем течении заболевания, выявление чувствительности к антивирусным препаратам, оценка эффективности проведенного антивирусного лечения, бесплодие неясного генеза , беременность с отягощенным акушерским анамнезом .
Отличительной особенностью данного метода является высокая степень достоверности полученных результатов, а также высокая чувствительность (60-85%) и специфичность (100%), возможность получения культуры возбудителя для дальнейшего изучения, в частности испытания чувствительности к антивирусным препаратам; недостатки - трудоемкость и высокая стоимость.
В настоящее время применяется ускоренный вирусологический метод выявления вируса. Сущность метода заключается в том, что материал, полученный от больных, культивируют совместно с культурой клеток Vero в течение 24 ч, после чего проводят выявление ранних антигенов вируса с помощью НМФА . Данный метод позволяет получить результат в течение 2 сут.
При использовании вирусологического метода следует учитывать, что частота выявления вируса в различных материалах от больных варьирует. Чаще вирус удается выделить из содержимого пузырьков, отделяемого из шейки матки и эякулята мужчин, реже - из влагалища, уретры, слюны.
Для экспресс-выявления антигенов ВПГ-1 и ВПГ-2 применяется МФА . В лаборатории используются две модификации метода: прямой и непрямой МФА. Прямой МФА позволяет выявить антиген ВПГ-1 и ВПГ-2 с помощью меченых к нему антител, полученных либо от иммунизированных животных, либо с помощью биотехнологии. Мазки-соскобы, мазки-отпечатки, высушенные и фиксированные в ацетоне, просматривают под люминесцентным микроскопом, используя масляную или водную иммерсию после предварительной обработки флюоресцирующим препаратом. При оценке результатов обращают внимание на характер и количество содержащих антигены ВПГ-1 и ВПГ-2 клеток, локализацию специфического свечения и его интенсивность. Достоинством МФА является невысокая стоимость, высокая специфичность (90%) и чувствительность (55-75%), быстрота получения результатов (в пределах 2 ч), недостатком - зависимость результатов от качества забора материала, стадии заболевания и от квалификации врача-вирусолога.
Другим методом, позволяющим выявить антигены вирусов герпеса, является ИФА . Преимуществами ИФА по сравнению с МФА и НМФА являются: более высокая степень чувствительности, возможность стандартизации и автоматизации исследований, снижение частоты ложных и субъективных ошибок, связанных с квалификацией врача-лаборанта. Чувствительность метода составляет 70-80%.
Важную роль для диагностики стадии ВПГ-инфекции имеет определение противовирусных IgM и IgG . Ложноотрицательный ответ на антитела против ВПГ-1 и ВПГ-2 класса М может быть у новорожденных. Тем не менее серологическое исследование важно и делать это надо путем сравнения титра парных сывороток (с интервалом 14-21 сут). Для установления диагноза в сложных случаях необходимы комплексное вирусологическое исследование по обнаружению антигенов ВПГ-1 и ВПГ-2 и анализ серологических показателей в динамике.
Для обнаружения вируса герпеса используются также молекулярно-генетические методы: ПЦР и ДНК-гибридизация . Наиболее чувствительным (90-98%), специфическим (90-100%) и распространенным методом определения ВПГ-1 и ВПГ-2 является ПЦР, позволяющая выявить единичные последовательности соответствующих нуклеиновых кислот. Субстанцией для исследования может служить любой биоматериал: содержимое везикул, соскоб клеток из очага поражения, пробы из уретры или цервикального канала, кровь, слюна и др. Кроме того, ПЦР позволяет выявить вирус непосредственно в мазке с урогенитальной области, без предварительного его накопления в культуре клеток. Особое значение имеет ПЦР-диагностика при бессимптомном простом герпесе.
ПЦР-исследованию на герпес обязательно должны подвергаться беременные, поскольку нахождение вируса в половых путях даже у серопозитивных женщин, имеющих иммунитет к вирусу герпеса, резко повышает риск инфицирования плода. ПЦР может использоваться также для дифференциальной диагностики ВПГ-1 и ВПГ-2.
В табл. 2.22 представлены основные методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых вирусами семейства Herpesviridae, а также биологические материалы от больных, необходимые для исследования.
Смотрите также:
