Кинезин из мозга крупного рогатого скота
Кинезин из мозга крупного рогатого скота обладает АТРазной активностью, которая при добавлении микротрубочек стимулируется более чем в 20 раз. Этот факт хорошо согласовывается с данными об его АТР-зависимой ассоциации с микротрубочками и способности к АТР-зависимому перемещению по микротрубочкам.
Кинезин из мозга крупного рогатого скота имеет молекулярную массу порядка 380 кДа и представляет собой тетрамер двух легких (62 кДа) и двух тяжелых (120 кДа) полипептидных цепей. При обработке кинезина альфа-химотрипсином , трипсином или субтилизином образуется устойчивый фрагмент тяжелой цепи с молекулярной массой около 45 кДа. Этот фрагмент после очистки сохраняет способность к АТР-зависимому связыванию с микротрубочками и обладает стимулируемой микротрубочками АТРазной активностью, в 3 - 7 раз превышающей АТРазную активность нативного кинезина. Предполагают, что именно в данном фрагменте находятся участки для связывания АТР и микротрубочек, а остальная часть молекулы необходима для осуществления регуляции активности кинезина и функций, связанных с движением.
Лимитирующей стадией в процессе гидролиза АТР молекулой кинезина является высвобождение ADP. Видимо, добавление микротрубочек стимулирует высвобождение ADP, увеличивая тем самым скорость гидролиза АТР. Для транслокаторной активности кинезина необходимо присутствие в среде Mg-нуклеозидтрифосфата ( Mg-NTP ) и ионов магния и значения рН от 6 до 9. Разные NTP отличаются по скорости движения микротрубочек по кинезину. По этому признаку можно построить ряд нуклеотидов по убыванию скорости нуклеотидзависимого движения: ATP-GTP-TTP-UTP-CTP-ITP. Присутствие АМР-PNP , триполифосфата , АТРгаммаS или ADP обратимо и зависимо от дозы ингибирует транслокаторную активность кинезина. К ингибиторам активности кинезина также относят ЭДТА , связывающий двухвалентные катионы, анион ортованадата и SH- реагенты (например, N-этилмалеимид).
Позднее кинезин различными методами был выявлен в самых разнообразных объектах: в дрозофиле , мозге крысы , зародышах морского ежа . Есть основания предполагать, что кинезин присутствует во всех эукариотических клетках как универсальный антеретроградный транслокатор.
Смотрите также:
