Простагландин-H2 D-изомераза: каталитические свойства
Глутатион-независимая простагландин-H2 D-изомераза проявляла каталитическую активность только при наличии в среде инкубации сульфгидрильных реагентов ( дитиотреитол , глутатион , бета-меркаптоэтанол , цистеин и цистеамин ) в концентрации ок.0.5 мМ. Эти соединения выполняют роль коферментов, поскольку не было обнаружено их стехиометрического окисления в ходе реакции. Выделенный фермент не содержал глутатион-S- трансферазной активности.
pH оптимум и кинетические параметры, KM и kкат реакции изомеризации PGH2 в PGD2 , катализируемой выделенным ферментом, были определены равными 9.5, 14 мкМ и 170 мин-1, соответственно.
Фермент обладал высокой стабильностью при хранении и проявлял устойчивость к температурной обработке при pH 8-11. Около 50% активности фермента сохранялось при выдерживании его при 100 градусах C в течение 5 мин при pH10. Однако фермент подвергался инактивации в процессе реакции. Реакция почти полностью прекращалась после 1 мин инкубации, когда в системе оставалось еще ок.40% непрореагировавшего PGH2.
Селективными ингибиторами простагландин-H2 D-изомеразы являются соединения, содержащие четырехвалентный селен , такие как SeCl4 и Nа2SeO3 ( Islum, 1991 ). Они не влияют на активность других ферментов каскада арахидоновой кислоты .
Выделенная простагландин-H2 D-изомераза являлась основным ферментом, ответственным за синтез PGD2 в мозге . Содержание фермента в исходном препарате, использованном для очистки фермента, было определено равным 90% от суммарной глутатион-независимой простагландин-H2 D-изомеразной активности (активность определялась в присутствии дитиотреитола) по результатам иммуннопреципитации поликлональными антителами к очищенному ферменту.
Смотрите также:
.gif)