Векторы растений
Специфика векторов для экспрессии рекомбинантных генов в клетках растений обусловлена главным образом регуляторными последовательностями нуклеотидов, которые обеспечивают эффективную транскрипцию генов в растительных тканях. Например, в векторе pCaMVCAT используются промотор и сайт полиаденилирования генов вируса мозаики цветной капусты , под контролем которых находится ген бактериальной хлорамфениколацетилтрансферазы (cat) . Этот ген-репортер применяется для оптимизации условий введения векторной ДНК в клетки растений и может быть заменен на любой другой ген. Вектор pCaMVCAT является челночным , т.е. может реплицироваться как в клетках E. coli, так и растений. В первом случае селектируемым маркером служит ген устойчивости к ампициллину .
Вектор pCaMVCAT принадлежит к группе так называемых DMGT-векторов (DNA-mediated gene transfer) , осуществляющих опосредованный ДНК перенос генов в клетки растений. Перенос генов в клетки растений опосредован ДНК вектора, так как они находятся в составе векторной молекулы. Для получения стабильных линий растительных клеток, которые бы содержали рекомбинантные ДНК в интегрированном в хромосомы состоянии и активно экспрессировали его, в состав DMGT-векторов вводят дополнительные селектируемые маркеры, которые придают клеткам, включившим экзогенную ДНК, определенный фенотип. Такими маркерами могут быть гены неомицинфосфотрансферазы II (NPT II) , гигромицинфосфотрансферазы (HPT) , дигидрофолатредуктазы , в результате экспрессии которых клетки приобретают устойчивость к канамицину , гигромицину B или метотрексату соответственно.
Смотрите также:
