Асимметричная ПЦР (Однонаправленная ПЦР)
Разработанные модификации методов ПЦР облегчили секвенирование амплифицированных фрагментов и повысили его эффективность. Предложен вариант асимметричной ПЦР, когда при амплификации концентрация одного из олигопраймеров в несколько десятков раз превосходит концентрацию другого праймера, в результате чего синтезируется преимущественно только одна, нужная для секвенирования цепочка ДНК. Для этой же цели (получения одноцепочечной ДНК) предложено использование магнитных частиц с фиксированным на их поверхности стрептавидином . При этом один из праймеров для проведения ПЦР метится биотином . Затем к продуктам амплификации добавляют магнитные частицы с пришитым стрептавидином. Благодаря прочному связыванию биотин - стрептавидин, меченная биотином последовательность ДНК фиксируется на магнитных частицах. С помощью щелочного лизиса с частиц удаляют вторую немеченую комплементарную последовательность ДНК, которую и используют для секвенирования.
Асимметричная ПЦР (asymmetric polymerase chain reaction, греч. a — отрицат. частица и symmetria — соразмерность, строгая правильность в расположении; греч. polymeres — состоящий из многих частей, многообразный; лат. re- — приставка, обозначающая повторность действия и actio — действие) - вариант ПЦР, при котором концентрация одного из двух праймеров очень низка, и он быстро истощается в ходе реакции. С этого момента синтез ДНК продолжается с одного праймера и нарабатываются одноцепочечные фрагмены ДНК. Асимметричная ПЦР проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования ДНК и гибридизационного анализа.
Син.: однонаправленная ПЦР.
Смотрите также:
