Вестерн-блоттинг, белковый блоттинг
Вестерн-блоттинг, белковый блоттинг (Western blotting) [англ. western — западный и blotting — промокание] — метод идентификации белков, аналогичный Саузерн-блотгибридизации, используемой для идентификации нуклеотидных последовательностей ДНК (см. Саузерн-блоттинг,Саузерн-блот-гибридизация, Саузерн-блот-анализ). Смесь белков разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, переносят на мембрану (чаще всего используют нитроцеллюлозные или нейлоновые фильтры), а затем детектируют наличие и местоположение искомого белка на мембране с помощью меченых антител (иммунопробы). Метод получил свое название по аналогии с ранее появившимися методами идентификации ДНК (Саузерн (южный) блоттинг) и РНК (Норзен (северный) блоттинг). Метод разработан Г. Старком с соавт. в 1979 г., термин «Вестерн-блоттинг.» предложен В. Барнетом в 1981 г.
Вестерн-блоттинг дает информацию о размере и количестве мутантных белков в клеточных экстрактах, полученных от пациентов со специфическими генетическими заболеваниями. Белки из клеточных экстрактов разделяют по размеру с помощью электрофореза в полиакриламидном геле и переносят на мембрану. Затем мембрану инкубируют со специфическими антителами к белкам. Вторичные антитела (направленные против первых антител), меченные флюоресцирующим красителем или радиоактивным веществом, выявляют взаимодействие белок-антитело. Вестерн-блоттинг применяется для определения наличия или отсутствия, а также размера мышечного белка дистрофина у пациентов с Х-сцепленной мышечной дистрофией .
Смотрите также:
