САУЗЕРН/ВЕСТЕРН/НОЗЕРН-БЛОТТИНГ
Саузерн-блоттинг, Саузерн-блот-гибридизация, Саузерн-блот-анализ (Southern blotting, Southern blot hybridization, Southern blot analysis, по имени Е. Саузерна; англ. blotting — промокание, получение реплики пятен) - метод идентификации участков ДНК, содержащих комплементарные ДНК-зонду нуклеотидные последовательности, среди смеси рестрикционных фрагментов ДНК, электрофоретически разделенных по размерам в геле и фиксированных на твердом носителе (обычно нитроцеллюлозные или нейлоновые фильтры). Метод предложен Е. Саузерном (англ. - южный) в 1975 г.
Саузерн-блоттинг - это первый метод диагностики на молекулярном уровне. В настоящее время он в значительной степени вытеснен методами, основанными на ПЦР , и прямым секвенированием ДНК . С помощью саузерн- блоттинга выделяют геномную ДНК пациента и разрезают ее на мелкие фрагменты рестриктазами (ферментами бактерий, которые разрезают ДНК в строго определенных местах). Полученные фрагменты разделяют по размеру с использованием электрофореза в aгарозном геле, переносят с помощью блоттинга на стабильный нейлоновый фильтр, фиксируют на фильтре, проводят гибридизацию с радиоактивно меченным ДНК-зондом, после чего проводят радиоавтографию. Метод позволяет выявлять мутации, если они изменяют длину фрагмента ДНК (сайт рестрикции), что, в свою очередь, изменяет результирующую картину ферментного расщепления. Саузерн-блоттинг по-прежнему наиболее часто применяется для выявления сцепления гена со специфическим врожденным полиморфизмом ДНК . Можно также проследить распространение гена у других членов семьи, даже если специфический молекулярный дефект, ассоциированный с наследственным заболеванием, не может быть идентифицирован ( рис 28 3 ).
См. также Блоттинг.
Смотрите также:
