Детекция результатов ПЦР или ОТ-ПЦР
Существует несколько способов детекции (или просмотра) результатов ПЦР. Самым простым и удобным методом является электрофорез . Электрофорез проводится в агарозном или полиакриламидном геле, содержащих бромистый этидий (химический агент, который связывается с двойной цепью ДНК и светится под действием УФ-света). Иногда вместо бромистого этидия гель окрашивают ионами серебра. После проведения ПЦР продукты реакции могут быть дополнительно обработаны рестрикционными эндонуклеазами (ферменты, разрезающие ДНК в строго определенных местах) и анализированы методом электрофореза. Такой метод часто используется авторами работ по генетике.
Иногда в ПЦР используют биотинилированные праймеры. Меченные биотином ПЦР-продукты переносят на твердый носитель (мембрану) и к ней добавляют авидин-пероксидазный комплекс. Затем проводят цветную пероксидазную реакцию с субстратом. Количество амплификата определяют по интенсивности цветной реакции. Такой метод аналогичен детекции при постановке ИФА . Праймеры можно модифицировать, используя различные флюоресцентные красители. Тогда, после проведения ПЦР, продукты реакции анализируют с помощью флуориметрии. Результаты ПЦР можно также контролировать колориметрированием. Широко применяется подход, основанный на молекулярной гибридизации . В этом случае применяют специфические химически модифицированные праймеры или зонды.
Смотрите также:
